En un estudio reciente publicado en Química analíticaUn equipo de investigación dirigido por WANG Junfeng de los Institutos Hefei de Ciencias Físicas de la Academia de Ciencias de China ha desarrollado un nuevo método de inmovilización para ensayos de resonancia de plasmón superficial (SPR) de proteínas de membrana, abordando eficazmente las principales limitaciones técnicas en este campo.
Las proteínas de membrana representan aproximadamente un tercio de las proteínas humanas y casi el 60% de los objetivos de los fármacos y desempeñan funciones clave en la señalización y el transporte. Medir con precisión sus interacciones con ligandos es vital para comprender la función y el desarrollo de fármacos. La resonancia de plasmón superficial (SPR), una técnica de referencia sin etiquetas, permite el análisis en tiempo real de la cinética de unión. Sin embargo, aplicar SPR a proteínas de membrana es difícil debido a los desafíos que supone inmovilizarlas de forma estable manteniendo su estructura y actividad nativas.
Para abordar este desafío, el equipo de investigación integró el sistema de conjugación covalente SpyCatcher-SpyTag con tecnología de nanodiscos basada en proteínas de membrana (MSP) para desarrollar una estrategia simple, eficiente y estable para inmovilizar proteínas de membrana en chips sensores. El enfoque implica generar una proteína de fusión MSP-SpyTag para incorporar la proteína de membrana objetivo en nanodiscos lipídicos. Los nanodiscos resultantes están etiquetados como SpyTag, que permite una captura altamente específica y eficiente mediante proteínas SpyCatcher preinmovilizadas en un chip CM5 mediante un acoplamiento de amina estándar. Este método facilita la inmovilización robusta y estable de proteínas de membrana dentro de un entorno lipídico casi nativo.
Utilizando este enfoque, el equipo realizó análisis SPR en tres tipos representativos de interacciones entre proteínas de membrana: proteína-lípido, proteína transmembrana-anticuerpo y proteína transmembrana-molécula pequeña. El método generó constantemente datos SPR de alta calidad, lo que permitió una cuantificación precisa de la cinética y las afinidades de unión.
Este nuevo enfoque aborda eficazmente los principales obstáculos de la tecnología SPR en los estudios de proteínas de membrana, con un potencial significativo para avanzar en la investigación de proteínas de membrana y el descubrimiento de fármacos.
Referencia: Yan L, Zhu C, Dong Y, Zhao H, Wu B, Wang J. Un método de inmovilización robusto para ensayos SPR de proteínas de membrana utilizando SpyCatcher-SpyTag. anal químico. 2025;97(36):19466-19471. doi: 10.1021/acs.analchem.5c01671
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